Гематологические показатели рыб это



Гематологическое исследование

По изменениям, происходящим в крови, можно судить о патологических процессах, протекающих в организме рыб. Результаты исследований крови с учетом клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных позволяют уточнить диагноз болезни (табл. 12, 13, 14, 15).

Таблица 12. Значение клинических показателей крови рыб

Показатель Низкие значения Высокие значения
Эритроцыты Анемия, гемолиз, нарушение осморегуляции, ровреждение жабр Стрессовая пилицитамия, дегидрадация, сгущение крови.
лейкоциты Стрессовая лейкоперия Лейкоцитоз — реакция на бактериальную инфекцию
Тромбоциты Слабая свертываемость крови Тромбоцитоз из-за хронического стресса
Хлориды Нарушение осморегуляции Сгущение крови
Холестерин Нарушение жирового обмена Хронический стресс, жировая перегрузка при кормлении
Время свертывания крови Острый стресс, тромбоцитопения Воздействие антибиотиков или сульфамидов
Глюкоза Крайнее истощение Острый или хронический стресс
гликоген Хронический стресс, истощение Несбалансированная диета, повреждение печени
Гематокрит Анемия, гемолиз, повреждение жабр Сгущение крови, стресс, полицитемия
Гемоглобин Анемия, гемолиз, повреждение жабр Сгущение крови, стресс, полицитемия
Метгемоглобин Норма Воздейтвие нитритов и некоторых других токсикантов, пересыщение воды кислородом
Белок Истощение, инфекционные болезни, повреждение почек, неправильное кормление Сгущение крови, нарушение водного баланса, гемолиз, интенсивный рост гонад
Таблица 13. Показатели красной крови у пресноводных рыб

Рыба Масса, г Гематокрит, % Гемоглобин, г% Эритроциты млн/мкл Примечание
Щука 24-44 1-2 Озеро, разновыростные группы
Белый толстолобик 16,0 43 11,4 2,2 Пруд, весна — лето
Белый толстолобик 140 42 11 2,1 Пруд, осень
Пестрый толстолобик 30-37 7,5-8,5 1,14-2,0 Корм — сухие сине-зеленые + комбикорм
Белый амур 27 32 8,6 1,8 Пруд, весна
320 34 9,6 1,9 Пруд, осень
Карп 17 8,9 1,8 Лето, естественные условия
Карп 10-22 7,5-8,8 1,4-1,7 Зимовка, ноябрь — декабрь
Карп 10-22 8,2-8,7 1,3-1,6 Зимовка, февраль — март
Карп 200-350 8,6-9,9 1,4-1,7 Лето, июнь — июль
Карп 400-500 38 8,6-10,4 1,14-1,44 Осень
Таблица 14. Количество лейкоцитов в крови у рыб, тыс/мкл

Рыба Возраст Количество лейкоцитов Примечание
Лещ 45-120 Сезонные колебания
Угорь 90
Щука 28-110 Сезонные колебания
Судак 35-95 Сезонные колебания
Голавль 40 Сезонные колебания
Карась 51
Линь 52
Карп 0+ 14-17 Пруд
Карп, 20-26 г 9-23 Пруд
Карп, 300-700 г 22-23 Пруд
Карп, 1400 г 43-59 Пруд
Карп 23 Самец-производитель
Карп 16 Самка-производитель
Белый толстолоб 1+ 98±14 Пруд
Пестрый толстолобик 1+ 62±8 Пруд
Радужная форель 34 Пруд
Ручьевая форель 26 Пруд
Таблица 15. Состав и свойства крови рыб

Показатели Белуга Стерлядь Осетр Севрюга Лосось Форель Щука Линь Лещ Карась Сазан Окунь Сом
Эритроциты, млн/мкл 0,8 1,5 0,8 1,6 1,3 1,2 1,4 1,8 1,7 1,6 2,6 1,5 1,4
Гемоглобин, г% 8,7 10,3 11,5 11,3 9,8 10,0 7,9 8,9 9,6 8,9 9,7 9,1 7,0
Гематокрит, % 36,0 43,0 47,0 40,0 36,0 30,0 20,0 22,0 24,0 23,0 27,0 29,0 20,0
Общее количество крови к массе тела, % 2,8 3,2 2,5 3,0 2,3 2,4 2,0 1,9 3,9 4,2 2,5 1,2 1,6
Количество лейкоцитов, тыс/мкл 40,4 32,0 25,5 37,5 52,0 49,0 51,0 43,0 40,0 38,0
Лейкоцитарная формула, %
эозинофилы
нейтрофилы 12,0 18,0 9,0 4,0 18,0 15,0 6,0 9,0 11,0
полиморфоядные 15,0 2,0 4,0 1,0 2,0 6,0 3,0 4,0 2,0
лимфоцыты 71,0 64,0 84,0 93,0 77,0 76,0 88,0 85,0 76,0
моноциты 2,0 16,0 3,0 2,0 3,0 3,0 3,0 2,0 1,0
Белок общий, % 5,1 5,9 6,3 5,8 6,7 3,6 4,7 5,1 7,1 8,5 6,8

Кровь для исследования берут пастеровской пипеткой из сосудов гемального канала хвостового стебля. Место взятия обрабатывают 70%-ным спиртом, просушивают ватным тампоном.

Определение количества эритроцитов и лейкоцитов. Кровь набирают в смеситель меланжера, используемого для подсчета эритроцитов млекопитающих, до метки 0,5 или 1 и насасывают жидкость для окрашивания и разведения крови до метки 101 (раствор А: нейтральрот — 25 мг; натрий хлористый — 0,6 г, вода дистиллированная-100 мл; раствор Б: кристаллвиолет — 12 мг, натрий лимоннокислый — 3,8 мг, формалин — 0,4 мл, вода дистиллированная — 100 мл). Раствор А набирают до половины расширения смесителя, раствор Б — до метки 101. (Готовят эти растворы непосредственно перед исследованием, хранить можно в холодильнике не более недели.) Под действием растворов ядра лейкоцитов окрашиваются в фиолетово-красный цвет, а цитоплазма — в розовый. В эритроцитах ядра окрашиваются в синий цвет.

После наполнения снимают резиновую трубку со смесителя, захватывают его между большим и средним пальцами и сильно встряхивают 2-5 мин, после чего выпускают из капилляра 3 капли жидкости, а 4-й каплей заряжают счетную камеру.

Принцип метода сводится к подсчету форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов) в камере Горяева. Сначала под малым увеличением микроскопа находят сетку и устанавливают равномерность распределения клеток, а затем подсчитывают их. Эритроциты считают в 5 квадратах (80 малых), расположенных по диагонали камеры Горяева. В каждом малом квадрате учитывают эритроциты, находящиеся внутри него, и те, которые касаются или лежат на его верхней и левой линиях.

Количество эритроцитов определяют по формуле

где m — общее количество клеток в 80 квадратах; γ — степень разведения крови; Х — число эритроцитов в 1 мкл.

Лейкоциты подсчитывают в 25 больших квадратах, разделенных на малые (400 малых), и определяют по формуле

где m — общее количество лейкоцитов; γ — степень разведения крови; Х — число лейкоцитов в 1 мкл; 400 — число просмотренных малых квадратов.

Выведение лейкоцитарной формулы. У рыб различают следующие виды лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, базофилы, нейтрофилы, эозинофилы (цв. табл. II). Некоторые авторы выделяют группу полиморфноядерных лейкоцитов.

Лимфоциты — небольшие клетки, немного меньше эритроцитов. Почти вся клетка заполнена ядром, цитоплазма видна в виде узкого ободка вокруг ядра. По Романовскому ядро окрашивается в фиолетово-розоватый цвет, цитоплазма — в голубоватый.

Моноциты — самые крупные клетки, ядро бобовидное, расположено эксцентрично, цитоплазма вакуолизирована, зернистость отсутствует.

Нейтрофилы — круглые клетки, имеют овальное, палочковидное или сегментированное ядро, расположенное у края клетки. В зависимости от возраста и формы ядра клетки разделяют на миелоциты, юные, палочкоядерные и сегментоядерные. Зернистость в цитоплазме окрашивается по Романовскому — Гимзе в фиолетово-розовый цвет.

Эозинофилы — по морфологии сходны с нейтрофилами. В цитоплазме находятся крупные многочисленные зернышки розового цвета.

Базофилы отличаются наличием в цитоплазме зерен фиолетового цвета.

Высушенный и фиксированный метанолом или спирт-эфиром (1:1) мазок крови окрашивают краской Романовского — Гимза. Раствор краски предварительно разводят нейтральной дистиллированной водой (1-2 капли на 1 мл воды). Разведенную краску подслаивают под предметное стекло, положенное мазком вниз, или красят мазки в контейнерах. В зависимости от температуры воздуха и качества краски мазок окрашивают 30-60 мин. После окраски препарат быстро ополаскивают водой, высушивают на воздухе, просматривают под микроскопом с иммерсионным объективом. Обычно просчитывают 200 лейкоцитов общепринятым методом.

Определение содержания гемоглобина.

Метод Сали. В градуированную пробирку гемометра Сали до метки 2 пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирают кровь до метки 20 мкл и вносят в пробирку с соляной кислотой. Затем перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 5 мин. После чего в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду, перемешивают и подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках.

Количество гемоглобина крови отсчитывают по нижнему мениску на градуированной пробирке. Выражают в г%.

Фотометрический метод. Мерной пипеткой в пробирку осторожно наливают 5 мл трансформирующего раствора (бикарбонат натрия — 1 г, красная кровяная соль — 0,2, цианистый калий или натрий — 0,05 г, дистиллированная вода — до 1 л). Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови, промывая ее раствором путем попеременного вдувания и выдувания. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют на 20 мин в холодильнике. Затем раствор из пробирки наливают в кюветы ФЭК и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения. Расчет гемоглобина (г/л) производят по формуле Х=D540 ·367,1 г/л, где D540 — показания ФЭК; 367,1 — коэффициент перерасчета.

Читайте также:  Передние конечности рыб таблица

Источник

Гематологические исследования и их использование для оценки здоровья рыб

Контроль за здоровьем рыб базируется на оценке их физиологического состояния. Одним из методов такой оценки является гематологический анализ. В настоящее время в дифференциальной диагностике болезней рыб наряду с паразитологическими, микробиологическими, вирусологическими исследованиями немаловажное значение приобретают исследования крови рыб.

При интенсивных технологиях выращивания рыбы, при которых наряду с инвазионными и инфекционными заболеваниями возникает ряд незаразных болезней, в том числе и водные токсикозы, диагностировать которые из-за отсутствия возбудителя значительно труднее, используются гематологические показатели. Этит показатели позволяют оценить физиологическое состояние рыбы, выявить влияние того или иного заболевания на ее организм, определить тяжесть течения болезни, прогнозировать ее исход.

На рыбоводных заводах по исскуственному воспроизводству перед выпуском молоди проводят оценку ее физиологической полноценности и жизнеспособности по гематологическим показателям, включая эти данные в рыбоводный стандарт.

В ихтиопатологии гематологический анализ включает определение следующих показателей крови: содержание гемоглобина, гематокритную величину, число эритроцитов, скорость оседания эритроцитов, содержание гемоглобина в одном эритроците, средний диаметр эритроцитов, общее число лейкоцитов, дифференциальный подсчет лейкоцитов, то есть лейкоцитарную формулу и лейкоцитарный профиль. В лабораторной гематологической диагностике принято считать, что первые шесть показателей характеризуют так называемую картину красной крови, то есть связанную с эритроцитами, а остальные два — белой, то есть лейкоцитов.

Изменения в показателях крови условно подразделяют на количественные и качественные. Количественные изменения проявляются как в увеличении, так и в уменьшении величины гематологических показателей по сравнению с физиологической нормой. Качественные изменения связаны с нарушением соотношения различных групп форменных элементов крови (как эритроцитов, так и лейкоцитов), а также с их патологическими изменениями.

Дифференцировать клетки крови рыб достаточно сложно. Для этого используют атласы клеток крови. Использование морфофизиологических принципов и методических подходов позволило Н.Т. Ивановой разработать классификацию клеток крови рыб с учетом достижений общей гематологии позвоночных. Позднее морфологические материалы пополнялись исследованиями функциональных свойств клеток крови рыб и их роли в формировании иммунного ответа. Это позволило на другом методическом уровне решить различные практические задачи.

Показатели красной крови позволяют диагностировать в организме анемический процесс. Анемией, или малокровием, называют состояние организма, характеризующееся уменьшением количества гемоглобина, гематокрита, числа эритроцитов и другими неспецифическими изменениями.

В развитии анемии у рыб И.Н. Остроумова выделила три стадии. Для I стадии характерно небольшое уменьшение количества гемоглобина и числа эритроцитов. В крови отмечено до 46% незрелых форм эритроцитов. Для II стадии характерно резко уменьшенное содержание гемоглобина и число эритроцитов (до 85%). В III стадии на фоне низких показателей гемоглобина, гематокрита и числа эритроцитов в крови отмечены лишь зрелые и разрушающиеся формы эритроцитов.

Резкое увеличение числа эритроцитов, или эритроцитоз, обычно сопровождается притоком в перифирическую кровь молодых форм эритроцитов, поэтому этот процесс может протекать без уменьшения числа эритроцитов, но с понижением гемоглобина (полихроматофильная, базофильная анемия, гиперхромазия).

Количество лейкоцитов имеет важное диагностическое значение, так как они принимают активное участие в защитных механизмах, то есть в воспалительных реакциях и иммунитете. Резкое увеличение числа лейкоцитов характеризуется как лейкоцитоз, а уменьшение их числа называется лейкопенией.

По морфологической картине крови ставят диагноз при таких заболеваниях рыб, как трипанозомоз, криптобиоз, сфероспороз (или воспаление плавательного пузыря), вирусный некроз эритроцитов, синдром эритроцитарных телец включений. Широко используются ихтиогематологические показатели в решении ряда экологических проблем, в частности в ихтиотоксикологии. Они служат надежным биомаркерами физиологического состояния при различных антропогенных загрязнениях водной среды.

Исследование гематологических показателей является важным элементом наблюдения за состоянием популяции рыб в естественных водоемах. Наглядным примером таких исследований являются работы с дальневосточными лососевыми. Находясь на позиции того, что смолтификация, как экологическая перестройка организма молоди, вызывает развитие в организме адаптивных реакций, в том числе и системы крови, авторы искали ее ответную реакцию на меняющуюся соленость воды. Выявленные закономерности, связанные с покатными миграциями молоди, наглядно демонстрируют, что по совокупности показателей морфологической картины крови, соответствующих определенной стадии смолтификации, можно судить об успешности процесса адаптации, а значит, и о степени готовности молоди к морскому периоду жизни.

Комплексный подход к системе крови рыб как эволюционному этапу общей гематологии позволил авторам дать общую для лососевых морфофизиологическую характеристику клеточных элементов, пополнив известные в литературе дванные своими материалами о появлении в кровяном русле бластов, патологических клеточных форм, функции тромбоцитов и др. При определении основных направлений практического использования ихтиогематологических исследований и резюмируя вышесказанное, следует опираться на ряд основных постулатов:

1. ихтиогематология отражает общую картину многообразия путей развития системы крови жвотного мира;

2. видеоспецифичность картины крови отражается как в количественных показателях (возрастных и сезонных колебаниях ее отдельных показателей), так и в ряде морфологических особенностей лейкоцитарного состава;

3. в формировании адаптивных реакций системы крови определяющее значение оказывают экологические факторы, выступающие в качестве стрессоров;

4. специфические изменения в картине крови возможно выявить только под влиянием специфического антигена (нарпимер, кровепаразитов), а все другие изменения вписываются в закономерности протекания общего адаптивного синдрома или стресса.

Источник: Рыбоводство и рыбное хозяйство, 2018 г., №5
Автор: Н.А.Головина, д-р биол. наук, профессор, старший научный сотрудник лаборатории ихтиопатологии "ВНИИПРХ"

Источник

Гематологические показатели рыб это

Ранняя диагностика заболеваний различной этиологии и своевременно принятые меры по их устранению могут, на наш взгляд, значительно повысить рентабельность рыбных хозяйств.

Беловское тепловодное рыбное хозяйство создано в 1979 г. В первые годы рыбхоз функционировал как нагульный для выращивания преимущественно товарного карпа из прудовых сеголетков Скарюпинского рыбхоза Кемеровской области. В 1982 г. проведен опыт заводского получения собственного посадочного материала от производителей беспородного карпа, выращенных в производственных условиях рыбхоза. С этого времени хозяйство функционирует как полносистемное. В настоящее время ООО «Беловское рыбное хозяйство» специализируется на разведении и выращивании карпа, белого и пестрого толстолобика, белого амура, канального сомика. Из привозного посадочного материала выращивают товарного осетра, бестера, форель. Рыбопосадочный материал поступает из Краснодарского края, Московской, Ростовской областей, Хакассии [3].

Беловское рыбное хозяйство следует признать благополучным в эпидемиологическом отношении. Благодаря неукоснительному соблюдению санитарно-эпидемиологических норм и своевременным профилактическим мероприятиям, за весь период работы рыбхоза не было зарегистрировано ни одного случая вирусных заболеваний рыб. Тем не менее, заболевания невирусной этиологии в разные годы работы рыбного хозяйства были отмечены. Так, например, в середине 80-х годов отмечалась вспышка ботриоцефалеза у молоди карпа, в лечении которого успешно использовали лечебные корма с добавлением препарата феносал. Паразитарные инвазии невысокой степени отмечаются постоянно, особенно в зимне-весенний периоды. При дефиците кормов и их низком качестве в период зимовки регистрируются вспышки алиментарного заболевания товарной молоди карпа [1, 2]. В связи с этим нами были проведены исследования по применению экспресс-методов для ранней диагностики заболеваний инфекционных, инвазионных и алиментарных заболеваний рыб.

Исследование зависимости гематологических показателей и зараженности рыб эктопаразитами. Исследования проводились летом 2001 и зимой 2002 года на Беловском рыбхозе. Для исследования отбирали сеголетков карпа (Cyprinus carpio). Отбор был случайный, внешние поражения при этом не учитывались. Отдельно осматривали особей с видимыми поражениями: отмечались изменения наружных покровов, плавников, жаберных дуг, внутренних органов. Образцы пораженных участков и соскобы покровов исследовались под микроскопом при увеличении ´70 — ´280. Были приготовлены фиксированные препараты некоторых обнаруженных эктопаразитов. Параллельно с этим учитывалось наличие признаков алиментарной болезни рыб [4, 5].

Читайте также:  Производство и переработка мяса рыбы

Летнее ихтиопатологическое исследование показало следующее. При наружном осмотре товарных карпов-сеголетков у 4 % обследованных рыб выявлен некроз жаберных лепестков; кожные покровы были окрашены неровно, с очагами некротизированной ткани. При микроскопическом исследовании обнаружены триходины (Trichodina sp.) — 2-7 шт. в поле зрения микроскопа. У внешне неповрежденных карпов признаки поражения отсутствовали, жабры были ослизнены, паразитов не обнаружено. В результате зимних ихтиопатологических исследований были выявлены единичные случаи заражения карпов Chilodonella cyprini, триходинами и моногенеями.

Существуют данные о том, что при различных паразитарных заболеваниях могут происходить изменения картины красной и белой крови, которые особенно четко можно проследить, изучая лейкоцитарную формулу. Изменение лейкоцитарной формулы является наиболее быстрой и типичной реакцией организма рыбы на проникновение возбудителей заболеваний.

В связи с этим осенью 2002 года в Беловском рыбхозе проведены работы с целью изучения лейкоцитарной формулы при различных паразитических заболеваниях. Сеголетки карпа подвергались ихтиопатологическому осмотру: отмечались изменения наружных покровов и плавников. Образцы пораженных участков и соскобы покровов исследовались под микроскопом при увеличении ´70 — ´280. Были приготовлены фиксированные препараты крови для изучения лейкоцитарной формулы рыб по стандартной методике, содержание гемоглобина определяли по методу Сали [4, 5].

При ихтиопатологическом исследовании карпа №1 установлено, что он заражен триходинами (2 шт. в поле зрения), хилодонеллами (1 шт. в поле зрения), моногенеями (1 шт. в поле зрения). Гемоглобин в норме, лимфоциты ниже нормы на 20,5 %, повышено содержание моноцитов на 26,0 %, присутствуют базофилы и эозинофилы, которые в норме должны отсутствовать, сегментоядерные нейтрофилы отсутствуют, палочкоядерные нейтрофилы соответствуют норме. При анализе лейкоцитарной формулы диагностирован острый воспалительный процесс.

При ихтиопатологическом исследовании карпа №2 установлено, что он заражен триходинами (3 шт. в поле зрения), аргулисом (1 шт. в поле зрения). Отмечен экзофтальм. На поверхности головы и жаберных крышках белый налет, гиперемия. Гемоглобин ниже нормы. Лимфоциты ниже нормы на 20,0 %, моноциты выше нормы на 11 %, базофилы выше нормы, эозинофилы выше нормы, сегментоядерные нейтрофилы ниже нормы на 75 %, палочкоядерные нейтрофилы соответствуют норме. Подтверждается диагноз острого воспалительного процесса и гиперемии.

При ихтиопатологическом исследовании карпа № 3 установлено, что он заражен хилодонеллами (10 шт. в поле зрения) и триходинами (10. шт. в поле зрения). Гемоглобин выше нормы, лимфоциты ниже нормы на 20 %, моноциты выше нормы на 66 %, базофилы и эозинофилы выше нормы, сегментоядерные нейтрофилы ниже нормы на 75 %, палочкоядерные нейтрофилы соответствуют норме. Диагноз — гиперемия, острый воспалительный процесс.

При ихтиопатологическом исследовании карпа № 4 выявлено истощение, слабый налет по всему телу, эктопаразитов не обнаружено, гемоглобин ниже нормы, лимфоциты ниже нормы на 25 %, моноциты ниже нормы на 60 %, базофилы выше нормы, сегментоядерные нейтрофилы ниже нормы, палочкоядерные нейтрофилы соответствуют норме. Выявлен острый воспалительный процесс.

При ихтиопатологическом исследовании карпа № 5 внешних признаков заболевания не обнаружено. Гемоглобин выше нормы. Лимфоциты ниже нормы на 34 %, моноциты ниже нормы на 40 %, базофилы выше нормы в 11 раз, эозинофилы выше нормы в 3 раза, сегментоядерные нейтрофилы выше нормы на 75 %, палочкоядерные нейтрофилы выше нормы в 5 раз. Диагноз: острый воспалительный процесс, возможно, вызванный интоксикацией.

У всех исследованных рыб присутствовали бластные формы моноцитов, которые в норме должны отсутствовать.

Сравнение лейкоцитарных формул показало, что по большинству лейкоцитов зараженные и незараженные рыбы различаются мало. Единственное различие — низкое содержание моноцитов у незараженных рыб по сравнению с зараженными.

Источник

Гематологические показатели крови петушков

Статья представляет собой перевод работы, посвященной исследованию клеток крови, морфологии и гематологических параметров сиамских бойцовых рыбок. Авторы исследования использовали образцы крови из хвостовой вены здоровых самцов (n=40) и самок (n=36). Гематологические показатели определялись с помощью стандартных методов. Морфологические особенности клеток крови описывались при рассмотрении под световым микроскопом. С помощью микрометра окуляра под увеличением в 1000 раз производилось измерение клеток крови на различных стадиях развития. Определялись эритроциты, тромбоциты и четыре типа лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, нейтрофилы и эозинофилы. Средний размер эритроцитов и их ядра составил 97,33 и 16,28 мкм 2 , соответственно. Результаты показывают положительную корреляцию между размером эритроцита и ядра. Обнаружена детерминированные полом различия в общем числе белых кровяных телец, лимфоцитов и нейтрофилов. Статистический анализ показал, что другие гематологические параметры и морфологии кровяных телец у самцов и самок не отличаются.

Введение
Гематологические параметры, используемые в ветеринарии и клинической медицине, являются индикаторами здоровья организма. Профиль биохимии крови и гематологии часто используются для оценки физиологического статуса позвоночных животных, рыб, рептилий и птиц. Оценка гемограммы включает подсчет общего числа эритроцитов, белых кровяных телец, определение гематокрита, концентрации гемоглобина, индекса созревания красной крови, подсчет числа различных типов лейкоцитов и оценка окрашенного образца периферической крови.

Сиамская бойцовая рыбка относится к лабиринтовым рыбам (Belontiidae). B.splenders с латинского означает бриллиантовый боец. Это точно характеризует вид, потому что самцы ярко окрашены и проявляют небывалую агрессию друг к другу. Естественный ареал обитания рыбок представлен мелководными пресными прудами с грязным дном и наводненными рисовыми полями. Благодаря лабиринтовому органу, рыбки могут дышать кислородом из атмосферы. Эта особенность позволяет выживать в бедных кислородом водоемах.

Материалы и методы
В центре по разведению рыб в Горгане, Иран, было измерено и взвешено 76 особей (40 самцов, 1,52±0,33 г, 3,82±0,43 см в длину; 36 самок, 1,69±0,48 г, 3,63±1,17 см в длину). В течение 1 недели рыбки содержались в 0,5 литровых стеклянных емкостях при температуре 28,5±1,3°C; pH 7.2, 13-часовм днем и 11-часовой ночью. Каждый день вода полностью менялась на свежую. Образцы крови брались с помощью прокола хвостовой вены анестезированных рыбок (MS-222 – 200мг/л).

Гематокрит определялся после переноса крови в микрокапилляр и центрифугирования в течение 5 минут со скоростью 4000g (расчет %/общий объем). Общее число эритроцитов (х 106/мм 3 ), лейкоцитов (х 103/мм 3 ) и тромбоцитов (х 103/мм 3 ) определялось с помощью новой счетной камеры Neubauer после разбавления крови физиологического раствора Daice. Концентрация гемоглобина определялась согласно процедуре цианметгемоглобин (г/деца-литр). Гематологические индексы рассчитывались согласно Seiverd (1964). Средний объем эритроцита (MCV) выражался в фемтолитрах (10−15 л), среднее содержание гемоглобина (MCH) выражалось в пиколитрах (10-6 л), средняя концентрация гемоглобина — в г/деца-литр.

Мазки крови готовились немедленно, высушивались на воздухе, в течение 5 минут фиксировались в 95% метаноле и окрашивались раствором Гимза. Для каждой особи готовилось 1-2 мазка, которые рассматривались под микроскопом. Окрашивание по Гимза использовалось для измерения и оценки клеток крови. Размеры клеток определялись с помощью микрометра окуляра. Их идентификация проводилась на основе морфологии и ультраструктуры, как при исследовании лейкоцитов (Rowley 1990; V´azquez and Guerrero 2007). Эритроциты рыб имеют эллиптическую форму и, таким образом, длину (EL) и ширину (EW), которые измерялись. Также измерялись длина (NL) и ширина (NW) ядра. В каждом случае размеры определялись на сухих мазках с помощью окулярного микрометра Olympus при увеличении в 1000 раз.

Результаты
Гематология

Полученные данные и сравнения гематологических показателей у самцов и самок бойцовых рыбок представлены в таблице 1. Результаты демонстрируют, что число белых кровяных телец и лимфоцитов у самок значительно больше чем у самцов, а нейтрофилов значительно меньше. Другие гематологические параметры значимо не отличались.

Эристроциты (х10 6 /мм 3 )

Тромбоциты (х10 3 /мм 3 )

Белые кровяные тельца (х10 3 /мм 3 )

Таблица 1. Гематологические показатели самцов и самок петушков. RBC — красные кровяные тельца (эритроциты); PCV — гематокрит; Hb — гемоглобин; MCV — средний объем эритроцита; MCH — среднее объемное содержание гемоглобина; MCHC — средняя концентрация гемоглобина. WBC — белые кровяные тельца (лейкоциты).
Hb и PCV в крови рыб снижается после вылова и транспортировки (Hattingh and Van Pletzen 1974). Особи содержались в условиях лаборатории и перед операцией наркотизировались раствором MS222.

Читайте также:  Рыба собака женщина дерево камень

Размер клеток крови и морфология
Размеры клеток крови и, в частности, эритроцитов самцов и самок представлены в таблице 2. Зрелые эритроциты преобладали к образцах, их размер и число значимо не отличалось между полами.

Параметры самцы самки общее
среднее макс. мин. ст.откл. n среднее макс. мин. ст.откл. n среднее макс. мин. ст.откл. n
EL 12.68 15.26 10.26 1.13 200 12.41 14.96 10.12 1.08 160 12.60 15.26 10.12 1.11 360
EW 9.52 11.06 7.37 0.75 200 10.52 12.59 8.74 0.93 160 9.84 12.59 7.37 0.92 360
NL 5.15 7.63 3.54 0.73 200 5.54 6.51 4.47 0.50 160 5.27 7.63 3.54 0.69 360
NW 3.75 4.68 2.83 0.45 200 4.30 5.10 3.46 0.46 160 3.92 5.10 2.83 0.52 360
ES, мкм 2 94.79 114.67 77.46 8.74 200 102.96 130.35 81.50 15.50 160 97.33 130.35 77.46 11.69 360
NS, мкм 2 15.22 23.00 8.80 3.06 200 18.85 23.86 15.26 2.64 160 16.28 23.86 8.80 3.36 360
EL/EW 1.34 1.96 0.99 0.20 200 1.18 1.40 0.98 0.11 160 1.29 1.96 0.98 0.19 360
NL/NW 1.39 2.16 1.03 0.23 200 1.30 1.67 0.89 0.19 160 1.36 2.16 0.89 0.22 360
NS/ES 6.55 12.00 4.72 1.46 200 5.53 7.40 4.42 0.72 160 6.24 12.00 4.42 1.35 360
Тромбоциты L 9.79 12.13 8.53 1.64 85 9.65 11.94 8.29 1.46 72 9.72 12.13 8.29 1.38 157
Тромбоциты W 3.98 5.87 2.85 0.63 85 4.05 5.62 3.71 0.65 72 4.01 5.87 2.85 0.75 157
Лимфоциты 5.26 5.8 4.8 0.34 66 5.31 5.9 4.8 0.33 52 5.28 5.9 4.8 0.33 118
Моноциты 6.94 7.8 5.7 0.73 47 6.76 7.8 5.7 0.74 33 6.85 7.8 5.7 0.72 80
Нейтрофилы 7.81 9.7 5.3 1.65 62 7.54 9.7 5.5 1.44 57 7.67 9.7 5.3 1.51 119
Эозинофилы 7.49 9.8 5.4 1.65 14 7.81 9.6 6.1 1.21 12 7.65 1.42 9.8 5.4 26

Таблица 2. Размеры клеток крови в микрометрах самцов и самок петушков. EL — длина эритроцита; EW — ширина эритроцита; NL — длина ядра; NW — ширина ядра; ES — размер эритроцита; NS — размер ядра; Тромбоцит L — длина тромбоцита; Тромбоцит W — ширина тромбоцита.

Зрелые эритроциты петушков имели овальную форму, ядро, розовую цитоплазму и центральную выпуклость, соответствующую расположению ядра. Ядро содержало хроматин и окрашивалось в темно-фиолетовую окраску.

В мазке тромбоциты часто скучивались вместе. Ядро тромбоцита округлое или овальное и темное. Цитоплазма сине-фиолетовая и располагается вокруг ядра. У петушка обнаружено четыре типа лейкоцитов: нейтрофилы, эозинофилы, лимфоциты и моноциты. Отдельная статистика по лейкоцитам представлена в таблице 2. Лимфоциты имели компактное, крупное, темное, расположенное в центре ядро. Светло-синяя тонкая цитоплазма покрывала узкую область вокруг ядра. Большинство моноцитов имело почковидную форму ядра, хроматин которого окрашивался менее интенсивно, чем у лимфоцитов. Их цитоплазма была сине-серая и занимала большую площадь. Нейтрофилы легко определялись по присутствию многочисленных, расположенных диффузно розово-красных цитоплазматических гранул. Ядро было круглое, овальное или, в большинстве случаев, двудольное, расположенное ближе к периферии. Эозинофилы представляли собой крупные, круглые, часто с неровными краями клетки. Они имели круглое или иногда двудольное ядро, расположенное не по центру. Цитоплазма эозинофилов наполнена ацидофильными гранулами, которые иногда скрывали ядро.

Мазок периферической крови петушков

Микрофотография мазка периферической крови петушков. a — эритроциты; b — тромбоциты; c l — лимфоциты; d m — моноциты; e — нейтрофилы; f eo -эозинофилы. масштаб =10 мкм.

Обсуждение
Данные, касающиеся гематологии петушков скудны. Даже о морфологии и типе клеток периферической крови до настоящего времени ничего не было известно. Основой для настоящей работы послужили результаты исследований других видов рыб. Согласно Wintrobe (1933) размер эритроцитов отражает положение вида на эволюционной лестнице: низшие позвоночные (циклостомы, эласмобранхии, хвостатые земноводные) имеют крупные эритроциты, тогда как у высших (млекопитающие) – клетки мелкие и не имеют ядра. В крови большинства видов рыб эритроциты являются преобладающим типом клеток. Одной из наиболее важных функций эритроцитов выступает перенос кислорода и углекислого газа. При этом важно соотношение размера к площади поверхности клетки. Таким образом, мелкие эритроциты имеют более высокую емкость для переноса газов. Таблица 3 демонстрирует размеры эритроцитов различных видов костных рыб. Зрелые эритроциты Betta splenders имеют размеры и ультраструктурные особенности, аналогичные зрелым эритроцитам других видов рыб.

Виды EL (мкм) EW (мкм) ES (мкм 2 ) NL (мкм) NW (мкм) NS (мкм 2 ) источники
Морская минога (Petromyzon marinus) 11.9 11.9 111.27 4.0 4.0 12.37 Gulliver 1875
Нематалоза (Nematalosa erebi) 12.2 8.0 76.65 4.8 2.3 8.67 Cleland & Johnston 1912
Золотая рыбка (Carassius auratus auratus) 12.5 8.5 83.45 5.5 4.0 17.28 Conroy & Rodriguez 1966
Европейский удильщик (Lophius piscatorius) 11.6 9.2 83.82 5.6 4.2 18.47 Lewis 1996
Меч-рыба (Xiphias gladius) 11.7 8.3 76.27 4.0 3.4 10.68 Kisch 1949a
Озёрный голец-кристивомер (Salvelinus namaycush) 16.0 11.3 142.00 6.5 4.4 22.46 Lewis 1996
Кета (Oncorhynchus keta) 131.08 35.16 Hardie &Hebert 2003
Атлантическая треска (Gadus morhua) 76.51 17.33 Hardie &Hebert 2003

Таблица 3. Размеры эритроцитов у различных видов костных. EL — длина эритроцита; EW — ширина эритроцита; ES — размер эритроцита; NL — длина ядра; NW — ширина ядра; NS — размер ядра.

Виды Тромбоциты Лимфоциты Нейтрофилы Моноциты Эозинофилы Источники
Carassius auratus 4.7–5.6 7.4–8.4 10.2–12.1 7.0–17 7.4–8.4 Groff & Zinkl (1999)
Oreochomis гибрид 4.7–5.5 4.6–5×5.7–6.4 6.38±1.04 9.4–10.7 5.77–6.7 Hrubec et al. (2000)
Cyprynus carpio 4.6×7.7 6.6–11.8 10.0–15 10.0–16 13.8 Groff & Zinkl (1999)
Cichlasoma dimerus 8.0–9×2.1–2.7 3.4–4.7 5–9.5 4.0–7.1 4.8–9.5 V´azquez & Guerrero (2007)

Таблица 4. Размер клеток в микрометрах (среднее±стандартное отклонение или доверительные интервалы) некоторых костных рыб

После красных кровяных телец преобладающим типом клеток являются тромбоциты. Они легко окрашиваются красителем Гимза; ядро становится темно-фиолетовым, а цитоплазма – светло розовой. Данные клетки более мелкие чем эритроциты. У костных рыб тромбоциты содержат лишь один тип гранул – лизосомы.

Окрашивание по Гимза позволяет идентифицировать все типы клеток крови: гранулоциты (нейтрофилы и эозинофилы), агранулоциты (моноциты и лимфоциты) и тромбоциты. Как правило лимфоциты преобладающий тип лейкоцитов в крови рыб (85% от всех белых клеток крови). В периферической крови петушков преобладали лимфоциты и нейтрофилы. Аналогичные результаты получены для видов Pimelodus maculates, Synbranchus marmoratus, Mugil platanus и Oncorhynchus mykiss. Лимфоциты являются одними наиболее важных клеток, ответственных за реализацию иммунных реакций. Они продуцируют антитела специфического иммунитета и предоставляют макрофаги. Повышение этих клеток обеспечивает защиту рыбок во враждебной среде. В настоящей работе у самок было больше лимфоцитов чем у самцов. Моноциты были крупнее лимфоцитов, имели круглую клетку и неровными краями. У рыб гранулоциты включали три типа клеток: наиболее распространенные нейтрофилы и эозинофилы и редкие базофилы. Эозинофилы и нейтрофилы относятся к гранулоцитам, встречающимся у большинства позвоночных. Нейтрофилы имели круглую клетку с нерегулярными краями. Эозинофилы – круглые клетки с многочисленными сферическими шипами, отходящими от мембраны.
——
Somayeh Pourali Motlagh, Asad Mohammadi Zarejabad, Rasol Ghorbani Nasrabadi, Ehsan Ahmadifar, Masoud Molaee. Haematology, morphology and blood cells characteristics of male and female Siamese fighting fish (Betta splendens). Comparative Clinical Pathology. 2012, Volume 21, Issue 1, pp 15-21.

Источник